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*推薦法測定ALP選用哪個緩沖液
IFCC 推薦法測定ALP 選用哪個緩沖液正常成人血清ALP主要來自肝臟,而來自骨組織的ALP一般少于總活性一半。
其各自含量與年齡密切相 關,但也受性別的影響。還可能存在少量的小腸型ALP,特別是血型為分泌型B型或O型的人。
現已知人體含4型ALP同工酶,即腸型(IALP)、胎盤型(PALP)、生殖細胞型(GALP)和非特異組織型(TUALP)ALP。其中非特異組織型堿性磷酸酶在基因表達后經過不同的修飾形成肝、腎、骨等次級同工酶。
[臨床意義] 肝膽疾病,尤其是阻塞性黃疸患者,該酶活性顯著升高。 骨骼疾病時血清ALP活性增高。
血清ALP活性測定成為鑒別肝膽疾病和診斷骨質增生不可缺少的指標。 [測定原理] 在堿性條件下,堿性磷酸酶將無色磷酸對硝基苯酚水解為黃色對硝基苯酚,在405nm測定對硝基苯酚生成 的速率,這個速率與血清中ALP活性成正比。
反應需要Mg2 作為激活劑。 [常用測定方法] 測定ALP活性受到組織來源、底物類型、反應溫度,特別是緩沖液種類的影響,目前,國際上生化試劑主要生產廠家,生產的ALP檢測試劑盒的主要差異就在于所使用的緩沖液不同。
常用的激活型緩沖液不僅起緩沖作用,并可作為磷酸的受體參與反應,因而能增進酶促反應的速率。 激活型緩沖液中,二乙醇胺(DEA)的激活作用比2-氨基-2-甲基-1-丙醇(AMP)的激活作用更強。
因此用不同緩沖液測定的ALP活性,其參考值不同。 不少國家,包括我國,多采用AMP或DEA做緩沖液,但這兩類物質不易提純,前者常混有5-氨基-3-吖-2, 2,5-三甲基乙醇,后者易含一乙醇胺,均對ALP有抑制作用。
故日本學者建議采用2-乙氨基乙醇緩沖液,而德國學者建議使用甲基葡萄糖胺緩沖液,此類試劑純度高,不含抑制ALP活性的物質,可不加螯合劑,其pK值高于DEA。 根據所使用的激活型緩沖液不同,目前常用的檢測方法主要有四種: 1、IFCC推薦方法:AMP(2-氨基-2-甲基-1-丙醇)緩沖液 正常參考范圍:45~130 U/L,37℃ 2、JSCC推薦方法:EAE(2-乙氨基乙醇)緩沖液 正常參考范圍:115~359 U/L,37℃ 3、GSCC推薦方法:DEA(二乙醇胺)緩沖液 正常參考范圍:80~260 U/L,37℃ 4、DSKG推薦方法(新GSCC方法):MEG(N-甲基-D-葡萄糖胺)緩沖液 正常參考范圍:45~130 U/L,37℃。